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細胞流式凋亡實驗

簡要描述:細胞流式凋亡實驗:細胞凋亡是指為維持內環境穩定,由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同,細胞凋亡不是一件被動的過程,而是主動過程,它涉及一系列基因的激活、表達以及調控等的作用。

  • 更新時間:2022-12-23
  • 瀏覽次數:1175

詳細介紹

細胞凋亡是指為維持內環境穩定,由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同,細胞凋亡不是一件被動的過程,而是主動過程,它涉及一系列基因的激活、表達以及調控等的作用,它并不是病理條件下,自體損傷的一種現象,而是為更好地適應生存環境而主動爭取的一種死亡過程。細胞凋亡是細胞的一種基本生物學現象,在多細胞生物去除不需要的或異常的細胞中起著必要的作用。它在生物體的進化、內環境的穩定以及多個系統的發育中起著重要的作用。細胞凋亡不僅是一種特殊的細胞死亡類型,而且具有重要的生物學意義及復雜的分子生物學機制。凋亡是多基因嚴格控制的過程。

Annexin V/PI雙染檢測細胞凋亡:在正常細胞中,磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細胞膜脂質雙層的內側,而在細胞凋亡早期,細胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內側翻向外側。Annexin V是一種Ca2+依賴性磷脂結合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,故可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。將Annexin V 進行熒光素標記,以標記了的Annexin V作為熒光探針,利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發生。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,但對凋亡中晚期的細胞和死細胞,PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用,就可以將處于不同凋亡時期的細胞區分開來。

二、實驗流程

1. 細胞培養,接種6孔板。

2. 誘導細胞凋亡。

3. 不含EDTA的胰酶消化貼壁細胞并離心收集。

4. 重懸細胞,加Annexin V/PI染色。

5. 流式細胞儀檢測。

6. 結果統計分析。

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