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外泌體指標鑒定實驗

簡要描述:外泌體指標鑒定實驗:外泌體是指包含了復雜 RNA 和蛋白質的小膜泡 (30-150nm),現今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。

  • 更新時間:2022-12-23
  • 瀏覽次數:1161

詳細介紹

一、實驗原理

所有培養的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。 有關他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的分子機制剛剛開始研究。 外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創診斷的開發。

外泌體(Exosome)主要檢測指標為CD63、CD9、CD81、Tsg101、Alix、HSP70等,針對外泌體的定性檢測,至少選擇2-3個指標就能滿足文章發表就可以。大部分文獻中沒有檢測內參,個別文章中使用了Actin、GAPDH和Tubulin作為內參進行檢測,外泌體中的Actin、GAPDH和Tubulin的表達豐度相對于正常細胞樣品中的較低,可能會檢測不到任何條帶或者條帶微弱。

二、實驗流程

1. 外泌體BCA法定量。

2. 變性聚丙烯酰胺不連續凝膠電泳(SDS-PAGE)。

3. 蛋白質轉移到PVDF膜。

4. 膜的封閉和抗體孵育。

5. 結果檢測。

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