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甲基化檢測MSP

簡要描述:甲基化檢測MSP:DNA經亞硫酸氫鈉處理后,所有未甲基化的胞腔啶發生脫氨基變為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶則不變,基于這種堿基的改變,然后設計針對甲基化和非甲基化序列的引物并進行聚合酶鏈反應(PCR)擴增,然后通過瓊脂糖凝膠電泳分析,確定與引物互補的DNA序列的甲基化狀態。

  • 更新時間:2022-12-23
  • 瀏覽次數:1215

詳細介紹

甲基化檢測原理:

甲基化特異性的PCR是種靈敏度高且操作相對簡單的甲基化研究方法。重亞硫酸鹽處理DNA后,基因組DNA發生的由甲基化狀態決定的序列改變。隨后進行引物特異性的PCR。該方法引物設計是關鍵。MSP中設計兩對引物,即一對結合處理后的甲基化DNA鏈(引物對M),另一對結合處理后的非甲基化DNA鏈(引物對U)。檢測MSP增產物,如果用引物M能擴增出片段,則說明檢測位點存在甲基化;若用引物U擴增出片段,則說明被檢測的位點不存在甲基化。

MSP:原理是基于DNA經亞硫酸氫鈉處理后,所有未甲基化的胞腔啶發生脫氨基變為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶則不變?;谶@種堿基的改變,然后設計針對甲基化和非甲基化序列的引物并進行聚合酶鏈反應(PCR)擴增,然后通過瓊脂糖凝膠電泳分析,確定與引物互補的DNA序列的甲基化狀態。

甲基化檢測優點:檢測靈敏度高,樣品消耗少,僅需1μg的基因組DNA,可用于石蠟包埋樣本;快速、簡單,省時。

服務流程:
1.根據目的基因啟動子序列設計相應的引物;

2.基因組DNA的提取和定量;

3.亞疏酸氫鈉修飾基因組DNA;

4.修飾后DNA純化回收;

5.a.結合實時定量PCR的qMSP;
  b.BSP,對PCR產物進行測序并與未經處理的序列比較;

6.數據處理:向客戶提供數據分析結果與實驗報告。

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