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甲基化檢測BSP/MSP法
DNA甲基化是表觀遺傳學的重要研究內容之一,它可以抑制基困的表達。甲基化通常發生在胞嘧啶的C5位,形成5-甲基胞嘧啶(5mC),甲基化的胞密啶多位于CpG島上。DNA甲基化在人的正常發育、X染色體失活、衰老以及許多人類疾病(如發育畸形、癌癥、心血管疾病、糖尿病和神經心理失調等)過程中發揮重要作用,已經成為表觀遺傳學和表觀基因組學的重要研究內容。該方法為甲基化檢測的金標準,可定量檢測基因甲基化水平?;蚪MDNA經亞硫酸氫鹽處理后,設計BSP引物擴增目的片段,然后對PCR產物進行克隆并選取10個轉化子序列,即可確定所研究的CpG區域的甲基化頻率。目前,基因的甲基化研究主要結合亞硫酸氫鈉處理和PCR技術,分為甲基化特異性PCR和硫化測序PCR。
甲基化檢測BSP:甲基化的胞嘧啶在亞硫酸氫鈉發生脫氨基后不會轉變,用一對持異性引物擴增后測序,再與DNA原始序列比對確定甲基化位點。測序法克服了只能針對單個位點檢測,并且這些位點必須是限制性內切酶識別位點的缺點,可以對任何基因序列的甲基化狀態進行檢測。
實驗服務:包含DNA抽提,引物設計合成,亞硫酸鹽處理,反應。每個反應可以檢測50bp左右,可以特定目的區域。
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