聚合酶鏈式反應,簡稱PCR,是一種將幾個或幾十個拷貝數DNA段擴增至上百萬份拷貝的方法,這是迄今為止為重要的技術之一。PCR技術的影響不僅僅局限于生物科學領域,幾乎人人都可以感受到PCR所帶來的改變,在親子鑒定以及犯罪調查中PCR技術便有廣泛應用。而人類基因組計劃,這一具有劃時代意義的測序工程,如果缺少了PCR技術手段則根本無法開始。
分子實驗-PCR:普通電泳PCR實驗的原理是DNA分子在電場中會向正極方向移動。不同長度的DNA由于受到凝膠介質的阻力不同,表現為不同的遷移率而被分開。
分子實驗-PCR具有的優點:
1、封閉反應,無需PCR后處理。
2、特異性強,靈敏度高。
3、采用對數期分析,摒棄終點數據,定量準確。
4、定量范圍寬,可達到10個數量級。
5、儀器在線式實時檢測,結果直觀,避免人為判斷。
6、可實現一管雙檢或多檢。
7、操作安全,縮短時間,提高效率。
分子實驗電泳緩沖液選擇:
電泳緩沖液為具有緩沖能力的離子溶液,通常在凝膠中使用,以保證電流流動同時防止pH值變化。電泳過程中,由于電子流動,負極逐漸偏向堿性,正極逐漸偏向酸性,從而導致水電解和pH值改變。氫氣和氧氣的釋放會引起電極起泡,這是凝膠運行的跡象。理想情況下,電泳緩沖液和凝膠制備緩沖液應相同,以確保有效的導電性。電泳緩沖液的選擇取決于樣品大小、運行時間和后電泳過程,其中醋酸鹽和硼酸是常用的兩種緩沖液。